===== Page 285 ===== 実際に採択された申請書① 基盤研究（C）の例 この申請書は令和2年度基盤研究（C）に採択されたものを、令和6年に行わ れた「令和7（2025）年度の公募」からの新フォーマットに変更したものであ る．内容に関しては新フォーマットに合わせて「（6）国際性」のパートを書き 加えたのと、もともと（3）で書くことになっていた「着想に至った経緯」を、 新フォーマットに合わせて少しだけ削って（1）へ移動させた．その他の部分は 変更なしで、応募したときのまま掲載してある。ただし分担者の名前は伏せて ある、掲載にあたって読み返してみて、もう少しこうすればよかったと思う部 分もあるが、提出した時点では最良のものである。採択された申請書の見本と してご活用いただきたい。 付け加えると、この申請書に書かれた研究計画は、和6年になってようや く完成して論文となった。研究とは時間のかかるものである。 なお、各種目の申請書に対して、どのようなことをどのような割合で書いて いくとよいのか、その目安を半土社ホームページ（https://www.yodosha. kakenhi/）のなかの「研究種目別「申請書の構成案」』で紹介している。 実際に採択された申請書①項目一覧 1） Web入力項目（前半）※電子申請時に入力 ・申請者と研究課題の情報 ・研究組纖 2） 申請書（研究計画調書） ・研究目的，研究方法など ・応募者の研究遂行能力及び研究環境 ・人権の保護及び法令等の遵守への対応 ・研究計画最終年度前年度応募を行う場合の記述事項 3）Web入力項目（後半）※電子申請時に入力 ・研究経費とその必要性 ・「研究費の応募・受入等の状況」のWeb入カイメージ p.286 p.287 p.288 p.292 P.294 p.295 p.296 p.298 285 ===== Page 286 ===== 1） Web入力項目（前半）※電子申請時に入力 ＜申請者と研究課題の情報＞ 機関番号研究種目番号 応募区分番号 00000 00 0 小区分 00000 整理番号 0000 令和7（2025）年度 基盤研究（C）（一般）研究計画調書 令和XX年XX月XXE 1版 新規 研究種目 小区分 研究代表者 氏名 所属研究機関 部局 職 研究課題名 基盤研究（C） 応募区分 構造生物化学関連 （フリガナ） 「コジママサヤス （漢字等） 児島 将康 久留米大学 付置研究所 教授 年度 令和7年度 令和8年度 令和9年度 令和10年度 令和11年度 総計 一般 グレリンの脂肪酸修飾基は、なぜグレリン受容体の活性化に必要なのか？ 研究経費 使用内訳（千円） （千円） 1,800 研究経費 「千円未満の 端数は切り ［捨てる 1,850 1.350 0 0 5,000 設備備品費消耗品費 1,600 1,600 1,100 4.300 旅費 0 0 0 0 0 0l 100 100 100 00 0 0 300 人件費・謝金 100 100 100 0 0 300 開示希望の有無 ＊ 番査結果の開示を希望する 研究計画最終年度前年度応募 その他 0 50 50 0 100 （286） 科研費獲得の方法とコツ 第9版 ===== Page 287 ===== <研究組織＞ 研究組織（研究代表者及び研究分担者） 氏名（年齢） 20202062（00）久留米大学 ■コジママサヤス 付置研究所 霧児島将康 所属研究機関 部局 職 教授 00000000（00） 久留米大学 露。〇〇 000 付置研究所 助教 役着参担 令和7年度エフォ 研究経費 ート （千円）（%） 医学博士 研究代表者として研究全般 1,600 30 博士（医学） クライオ電子顕微鏡での解析 のための複合体調節 2001 5 合計2名 研究経費合計 1,800 00000-00-000-000-0000 287 ===== Page 288 ===== 2） 申請書（研究計画調書） ＜研究目的。研究方法など＞ 基盤研究（C）（一般）1 1研究目的、研究方法など 本研究計画調者は「小区分」の審査区分で査される。記述に当たっては、「科学研究費助成事業における査及び評価に 関する規程」（公募要領参照）を参考にすること。 本研究の目的と方法などについて、4頁以内で記述すること。 冒頭にその概要を簡潔にまとめて記述し、本文には、（1）本研究の学術的背景や本研究の着想に至った経線、研究課題の核心 をなす学術的「問い」、（2）本研究の目的および学術的独自性と創造性、（3）関連分野の研究動向と本研究の 究で何をどのように、どこまで明らかにしようとするのか、（5）本研究の目的を達成するための準備状況、（6）本研究がどのよ うな国際性（将来的に世界の研究をけん引する、協同を通じて世界の研究の発展に貢献する、が国独自の研究としての高い 価値を創出する等）を有するかについて具体的かつ明確に記述すること。 本研究を研究分担者とともに行う場合は、研究代表者、研究分担者の具体的な役割を記述すること。 グレリンは申請者らが発見した摂食亢進作用を示すペプチドホルモンで、N未端から3番目の セリン残基が脂肪酸のオクタン酸によって修飾されている。しかもこの脂肪酸修飾がグレリンの 活性に必要であるという特徴を持つ。なぜグレリンは脂肪酸の修飾がないと活性を示さないのか、 それを明らかにするためにはクレリンが結合したグレリン受容体の立体構造の解明が必要である。 最近になって申請者らは不活性型のグレリン受容体の構造解明に成功した。グレリン受容体は典 型的なGPCRの構造であるが、第6と第7の膜通領域の間に疎水性に富んだギャップ構造があ り、この部分とグレリンの脂肪酸修飾基が相互作用してグレリン受容体を活性型に変換するので はないかと考えられた。しかし、それはまだ証明されたわけではない。 本研究では高活性型の変異グレリン受容体のX線結晶構造解析や、クライオ電子顕微鏡による Gタンパク質との複合体を解析することによって、グレリンが結合した活性型グレリン受容体の 立体構造を明らかにする。この研究によってグレリンの脂肪酸修飾基が受容体を活性型に変換す るメカニズムが明らかになり、GPCRの活性化機構に新たな知見をもたらすと期待される。 （1） 本研究の学術的背景や本研究の着想に至った経緯、研究課題の核心をなす学術的「問い」 （グレリンについて） グレリンは申請者らが 1999年に発見したペプチドホルモンで、胃から分NGSSFS PEHQRV 泌されて食欲刺激、摂食亢進、成長ホルモン分泌 促進、海馬での神経発生などの作用を示す。申請 者らのグレリンの発見論文（Nature, 1999）は被 引用回数が6,300件、グレリンに関する発表論文 は1万編以上と（2019年 10月末現在）現在もグレ リンに関して活発な研究が行われている。 活性に必要な脂肪酸部分（主にオクタン酸） （グレリンの活性には脂肪酸修飾が必要である） グレリンは、N末端から3番目のセリン残基が 脂肪酸のオクタン酸によって修飾されているという特徴的な構造をしており（上図）、しかもこ の修飾がないと活性を示さない。このような脂肪酸で修飾されたペプチドホルモンは現在のとこ ろグレリンだけしか知られていない。なぜグレリンでは脂肪酸の修飾が活性発現に必要なのか、 それを明らかにするためにはグレリン受容体とグレリンとの結合を三次元立体構造（3D構造） で解明する必要がある。しかしそれは現在でも成功していない。 （不活性型のグレリン受容体構造から明らかになったこと） 申請者はグレリン受容体の活性 化機構を明らかにするために、数年前からグレリン受容体の結晶構造解析を始めた。そして〇〇 大学〇〇先生のグループとの共同研究によって、グレリン受容体にアンタゴニストが結合した 不活性型の構造解明に成功した（未発表）。その結果、グレリン受容体は典型的なGPCRの3D 構造を示すが、グレリンの脂肪酸修飾基の役割を示唆する特徴的な構造があることがわかった。 それは第6膜貫通領域（TM6）と第7膜貫通領域（TM7）の間のギャップ構造である。このギャッ プ構造を形成するアミノ酸には疎水性の高いフェニルアラニン残基が多く、ギャップ構造と脂質 との相互作用が推測された。実際にいくつかの脂質性リガンドのGPCRにおいてはTM7とTM1 の間（S1P1やEP4など）や、TM3とTM4の間（GPR40）、TM4とTM5の間（PAFR）にギャッ プ構造があり、このギャップ構造を通してリガンドが側面からリガンド結合ボケットにアク （288 ※この申請書の例は、令和2年度の基盤研究（C）に採択されたものを令和7年度の様式に変更したものだが、申請中の年 暦は、一部を当時のままとしてある。 科研費獲得の方法とコツ第9版 ===== Page 289 ===== ＜研究目的，研究方法など（つづき）＞ 基盤研究（C）（一般） 2 【1 研究目的、研究方法など（つづき】 セスすると推定されている。グレリン受容体の場合はこのギャッ プ構造が、グレリンの脂肪酸修飾基と相互作用していると考えら 申請者らが明らかにした不活 性型のグレリン受容体の構造 れる。またGPCR受容体の活性化に重要なTM6とTM7という膜 通領域が関与しているために、グレリン受容体の活性化メカニズ ムへの関与も考えられた。 （本研究の着想に至った経緯） 申請者は1999年に摂食亢進ホルモンのグレリンを発見し、そ の構造を明らかにした。グレリンはN未端から3番目のセリン残基 の側鎖がオクタン酸によって修飾されており、しかもこの脂肪酸 修飾基が活性発現に必須であることを見いだした。この活性発現 の仕組みを解明するには、グレリンが結合したグレリン受容体の 3D構造解析が必要であったが、当時は解析技術が未確立だった。 2007年になってスタンフォード大学のコビルカたちによって GPCRの3D構造解析技術が確立されたが、個々の受容体にはそれ ぞれ特性があり、受容体ごとにアミノ酸の置換による安定化や、 T4リゾチームなどの共結晶タンパク質との融合、受容体抗体の使 用など、さまざまな検討が必要であった。申請者はグレリン受容 体の基底状態（不活性型）と活性型の両方の3D構造解析を目指し グレリン受容体のTM6 とTM7の間のギャップ 構造。この間にグレリン の脂肪酸修飾基が入り込 むと考えられる。 て、それぞれ次のような戦略で進めた。 ① 不活性型グレリン受容体の構造解明：グレリン受容体に融合タンパク質としてbRIL（熱支 定化したアポ型チトクロム b562 変異体）を用い、アンタゴニストとグレリン受容体抗体との複 合体によって結晶化に成功し不活性型のグレリン受容体の3D構造を解明した（論文準備中）。 ② 活性型グレリン受容体の構造解明：不活性型の結晶構造解明に成功したアミノ酸変異グレ リン受容体と、グレリンを結合させて結晶化を試みたがうまくいかなかった。またグレリン受容 体を活性型に固定するモノクローナル抗体やナノボディ（アルバカの一本鎖重抗体）の作成を 試みたが、グレリン受容体の抗原性が低く、これもうまくいかなかった。 そこで活性型グレリン受容体の3D構造を明らかにするために、アミノ酸変異によって高活性 型のグレリン受容体を用いて結晶化し線構造解析を試みることと、クライオ電子顕微鏡によっ て受容体・リガンド・Gタンパク質の複合体で3D構造を解明する、今回の研究計画を立てた。 （解決すべき学術的「問い」） 上記のように、グレリンの脂肪酸修飾基とグレリン受容体と の相互作用を解明するには、グレリンとグレリン受容体が結合した状態の3D構造を解明す る必要がある。しかし、どのGPCRについても内因性リカンドが結合した活性型受容体の3D 構造を明らかにすることは現在でも困難な研究であり、グレリン受容体においてもまだ成功して （2）本研究の目的および学術的独自性と創造性 （本研究の目的）本研究の最終目標は、グレリンが結合した状態でのグレリン受容体の3D構 造を解明することによって、グレリンの脂肪酸修飾の部分が、どのようにして受容体の構造を不 活性型から活性型に変換するのか、そのメカニズムを解明することである。 （本研究の学術的独自性と創造性） グレリンはペプチド部分だけでなく、脂肪酸の修飾基が ないと活性を示さないという特徴的な構造をしており、なぜ脂肪酸部分がグレリン受容体の活性 化に必要なのかは不明であった。申請者らはこの疑問に答えるためにグレリン受容体の結晶構造 解析を進め、まず不活性型の構造を解明した。その結果、TM6とTM7間のギャップ構造部分の 疎水性アミノ酸と、グレリンの脂肪酸部分の相互作用によって、TM6が活性型の位置に動き、 それによって受容体が活性型に転換することが示唆された。このような膜通領域間のギャップ 構造は脂質GPCRにもみられることから、グレリン受容体はペプチド性 GPCRと脂質 GPCRの両 方の特徴をもったハイブリッド型GPCRである。ただしこのギャップ構造は、脂質GPCRの場合 はリガンドが受容体の側面からリガンド結合ポケットに侵入する経路であることが、グレリン受 容体（リガンドは細胞膜表面から侵入）とは異なっており、活性化機構の違いが示唆される。 グレリンとグレリン受容体が結合した3D構造が解明されれば、グレリンの脂肪酸修飾基による （289 ===== Page 290 ===== ＜研究目的。研究方法など（つづき）＞ 基盤研究（C）（一般）3 ［1 研究目的、研究方法など（つづき）】 受容体の活性化機構が明らかになり、GPCRの活性化機構に新しい知見をもたらすと期待される。 （3）関連分野の研究動向と本研究の位置づけ GPCRの立体構造解明の研究は、これまでは不活性型の3D構造解明が主だったが、現在では 活性型の構造を解明して、受容体の活性化機構を明らかにする研究が中心になっている。また不 活性型の構造解明には主に線結晶構造解明が使われてきたが、活性型 GPCRの3D構造解明では Gタンパク質との複合体をクライオ電頭で解析することが主流になりつつある。Gタンパク質に ついては、GiとGsについては培養細胞で効率よく発現されるが、グレリン受容体がカップリン グするGqについては発現効率が悪く、Gaとの複合体で解明されたGPCRの3D構造はまだない。 今回の研究計画によってグレリンの脂肪酸修飾がどのようにグレリン受容体を活性型に変換す るのかが明らかになるとともに、Gqとカップリングする他のGPCRの3D構造解明にも大いに貢 献できると考える。 （4）本研究で何をどのように、どこまで明らかにしようとするのか グレリンが結合したグレリン受容体の3D構造の解明を、X線結晶構造解析とクライオ電子頭微 鏡による解析の二つで並行して進めていく。 1，X線結晶構造解析によるグレリンが結合したグレリン受容体の3D構造解明（児島） X線結晶構造解析によって活性型の3D構造が解かれたGPCRには、エンドセリン、ニューロテ ンシン、アンジオテンシンなどがある。これらはリガンド結合能が極めて高いもの（エンドセリ ン受容体、ETBR）や、アミノ酸置換などで受容体の熱安定性を高めたもの（ニューロテンシン 受容体、アンジオテンシン！！受容体）で3D構造が解かれている。 そこでアミノ酸のランダム変異ライブラリーによって、リガンド結合能が高い高活性型のグレ リン受容体や、熱安定性の高い受容体を探索し、グレリンと結合したグレリン受容体の結晶を形 成する。クロンテック社の Diversify PCR Random Mutagenesis K 残基のグレリン受容体に1～2個の変異アミノ酸が入るようにする。これをプラスミドベクター に組み込み、培養細胞に発現させる。この発現細胞において IP3基礎活性の測定や、グレリン添 加による細胞内カルシウム濃度の変化を指標にして、高活性型のグレリン受容体を見出す。変異 型グレリン受容体の熱安定性は蛍光ゲル濾過（FSEC）によってチェックする。 予備的なスクリーニングの検討では、250種類の変異型グレリン受容体クローンにおいて、高 活性な3つの変異体を見出している。これらはASpとGIuのアミノ酸ペア、ArgとLySのアミノ 酸ペアなど、同族のアミノ酸の置換によって受容体の活性が変化していた。 さらにスクリーニング数を増やすことと、DNAシークエンスによって見出した変異体クロー ンのアミノ酸置換部位を同定し、これらのアミノ酸変異を複数組み合わせることで、より高活性 で熱安定性のよいグレリン受容体を見出していく。見出した高活性で熱安定性のよいグレリン受 容体とグレリンとの結晶化を試み、結晶形成ができれば線による結晶構造解析を行っていく。 2. クライオ電子顕微鏡によるグレリンが結合したグレリン受容体の3D構造解明（児島、◎ 最近の膜タンパク質の3D構造解明には、クライオ電子顕微鏡を用いることが主流となっ てきている。しかしクライオ電子顕微鏡では、解析対象のタンパク質にはある程度の分子量が必 要（60~70kDa以上）であり、とくに膜タンパク質は界面活性剤ミセルに包まれていることも あって 110kDa以上の分子量が必要である。そのためGPCR（平均の分子量は40kDa程度）の解 析においてはGタンパク質（分子量は80kDa程度）との複合体を形成して解析されていることが 多い。したがってグレリン受容体の活性型の構造解析においても、Gタンパク質（グレリン受容体 の場合は主にGqとカップリングしている）との複合体形成が必要である。 しかしGタンパク質の中でもグレリン受容体とカップリングするGqタンパク質だけは、他のG タンパク質に比べて発現が非常に困難であり、これまでにGqとカップリングしたGPCR受容体 で3D構造が解かれた報告はまだない。 そこでクライオ電子顕微鏡による3D構造解析を目指して、グレリン・グレリン受容体・Gタン パク質の複合体を形成するために、申請者らは次のような方法を考えている。 ① Gilqの変異体を使って発現効率を高める GqのN未端部分をGiに置き換えた変異体（以下、Gi/q）では発現効率が上がることが知られ （290） 科研費獲得の方法とコツ 第9版 ===== Page 291 ===== ＜研究目的，研究方法など（つづき）＞ 基盤研究（C）（一般） 4 ［1 研究目的、研究方法など（つづき）】 ている。Gilqを昆虫細胞で発現させて精製し、別の昆虫細胞で発現し精製したGBとGyとGタ ンパク質複合体を形成させる。このGタンパク質複合体に、さらにグレリンとグレリン受容体と の複合体を形成させる。複合体の形成においては、グレリン受容体、グレリン、Gタンパク質と ともにATPジホスフォヒドロラーゼであるアピラーゼ （apyrase）を加えることで、Gタンパク質 から放出されたGDPをGMPへと加水分解し、GDPがグレリン受容体・Gタンパク質複合体と再 結合して解離させるのを防止する。さらにGaとGBYの接合面を認識するモノクローナル抗体 （共同研究先より入手済み）によってGTP ySによるGタンパク質のヘテロトリマー解離を阻書 する。これによってグレリン受容体とGタンパク質複合体がより安定になることが期待される。 ② Gqのaby タンパク質とグレリン受容体を昆虫細胞に同時に発現し複合体として精製する 予備的な検討では、昆虫細胞においてグレリン受容体・Gタンパク質を同時に発現させること ができ、細胞の抽出物から複合体の精製が可能であることを確かめており、複合体の発現効率と 精製効率を上げるために、ベクターの混合比率や、精製方法の検討を行う予定である。 ③ 分子シャペロンRic8Aを使ってGq aの発現を高める Ric8Aという分子シャペロンを共発現させるとGq αタンパク質の発現量が劇的に増加するこ とが知られている（Chan et al. JBC 286. 2011）。そこで昆虫細胞を使ってRic8 ることでGq aの発現量を増加させ、単一のものに精製する。 ④ Giとのカップリングで解析する グレリン受容体はGqカップリングが主であるが、Giともカップリングする。実際に申請者は 褐色脂肪細胞の培養系において、グレリン添加によるCAMP産生抑制が百日咳毒素によってキャ ンセルされることから、グレリン受容体がGiとカップリングすることを確認している。これまで の研究ではGiは培養細胞系において発現が良好であり、Mオピオイド受容体やニューロテンシン 受容体などではGiとの複合体を形成してクライオ電頭による活性型の構造解明に成功している。 そこでグレリン受容体の場合もGiとのカップリングを行い、活性型の構造を明らかにする。 （試料調製ができたあとの構造解析について） グレリンと活性 型受容体との結晶化がうまくいった場合は、Spring-8において線 分子量 Gq 複合体 回折を行う。グレリン・グレリン受容体・Gタンパク質の複合体の 形成に成功したときには、BINDS（創薬等先端技術支援基盤プラッ トフォーム）を通じてクライオ電子顕微鏡での解析に進めていく。 （5）本研究の目的を達成するための準備状況 発現した Gq タンパク 質複合体の電気泳動 （発現した GVgはGp およびGyと複合体を 形成している） 不活性型のグレリン受容体の3D構造解明には成功しており、現 在論文投稿の準備中である。この研究によって、グレリン受容体タ ンパク質の大量発現と精製はできており、活性型の結晶化や、クラ - GVg （41.4kDa） ーGP （37.5kDa） イオ電頭のための複合体形成用の受容体は調達可能である。またグ レリンは化学合成したペプチドを十分量保有している。 Gタンパク質（とくに発現が難しいGq）については、Gタンパク 質の専門家である〇〇先生（現・〇〇薬科大学）の指導を受け、発 現効率をあげるためにGiのN末端部分をGqに融合したもの（Gi/q） 4Gy （7.9kDa） の発現を試みている（右図） （6） 本研究がどのような国際性を有するか GPCRは創薬のターゲットとして国際的にも注目されており、特に本研究では、がん悪液質へ の応用が進んでいるグレリン受容体に焦点を当てている。このテーマは米国〇〇〇〇研究所のC 〇博士との国際共同研究に基づいており、特に〇〇博士の研究グループが持つ最新のGPCRの構 造解析技術を活用することで、従来不可能だったグレリン受容体の活性化メカニズムを解明でき る可能性が高い。この成果はGPCR研究全体に新しい視点を提供し、創業分野においても国際的 に重要な貢献となる。 以上の研究によって、摂食亢進ホルモン「グレリン」の脂肪酸修飾基はなぜ受容体活性化に必 要なのかを明らかにする計画である。 （29 ===== Page 292 ===== ＜応募者の研究遂行能力及び研究環境＞ 基盤研究（C）（一般）5 2応募者の研究遂行能力及び研究環境 応募者（研究代表者、研究分担者）の研究計画の実行可能性を示すため、（1）これまでの研究活動（主要な研究業績を合 む）、（2）研究環境（研究送行に必要な研究施設・設備・研究資料等を含む）について2頁以内で記述すること。 「（1）これまでの研究活動」の記述には、研究計画に関連した国際的な取組（国際共同研究の実施歴や海外機関での研究歴等） がある場合には必要に応じてその内容を含めること。また、研究活動を中断していた期間がある場合にはその説明などを含め （1） これまでの研究活動 グレリンに関するこれまでの研究成果：研究代表者は、グレリンの発見以来、様々な生物種 におけるグレリンの構造決定と機能の解明、グレリンの測定系の開発、グレリンの生理作用の解 明、グレリンの活性化に必須な脂肪酸修飾のメカニズムの解明などを行ってきた。 1. Kojima, M.， Hosoda, H.， Date, Y.， Nakazato, M.， Matsuo hormone-releasing acy lated peptide from stomach. Nature 402, 2. Hosoda, H.， Kojima, M.， Matsuo, H. & Kangawa, K. Ghrel of rat ghrelin peptide in gastrointestinal tissue 3. Kaiya,H.， Kojima, M.， Hosoda,H.， Koda,A.， Yamamoto,K.， Minamitake, Y.， Kikuyama, S. & Kangawa, K. Bullfrog ghrelin is third threonine residue. J Biol Chem 276, 40441-8 （2001）. 4. Nakazato, M.， Murakami, N.， Date, Y.， Kojima, M.， Matsuo, H.， 5 6. for ghrelin in the central regulation of feeding. Nature 409, Kojima, M, Kangawa K. Ghrelin: structure and function. Physio Nishi Y, Hicjima H, Hosoda H, Kaiya H, Mori K, Fukue Y, Yanas M. Ingested medium-chain fatty acids are directly util Endocrinology. 146:2255-2264（2005）. 7. Sato T, Fukue Y, Teranishi H, Yoshida Y, Kojima, M. Molecula its regulation by fasting and 2-deoxy-d-glucose administration 8. Sato T, Kurokawa M, Nakashima Y, Ida T, Takahashi T, Fu Kojima, M. Ghrelin deficiency does not influence feeding per 9. Ohgusu H, Shirouzu K, Nakamura Y, Nakashima Y, IdaT, S acyltransferase （GOAT） has a preference for n-hexanoy l-CoA o Biochem Biophys Res Commun. 386（1）：153-8 （2009）. 研究代表者が責任編集を努めた Methods in Enzymology 514 “Ghrelin"が2012年10月に発刊されている（右に表紙 また最近のグレリンに関する研究では、グレリン遺伝子の 発現調節機構の研究、グレリンによる海馬の神経回路形成の 研究、膵臓のグレリンと時計遺伝子の関連、グレリンによる MMethods in ENZYMOLOGY 自発運動の制御などの研究を行ってきた。 10.Shimura Y， Ohgusu H， Sato T， Kojima， M. Regulation of the Human Ghrelin. Promoter Activity by Transcription volume 514 Chrelin NF-KB and Nkx2.2. Int J Endocrinol. 2015;2015:580908 （2015）. 11. Kim Y, Kim S, Kim C, Sato T, Kojima, M, Park S. Ghrelin is required for dictary restriction-induced enhancement of Masavasu Kojima Kenji Kangiwa hippocampal neurogenesis: lessons from ghrelin knockou mice. Endocr J. 62（3）：269-75 （2015）. 12.LiE,Kim Y, Kim S, Sato T, Kojima, M, Park S. Ghrelin stimulates proliferation, migration and differentiation of neu progenitors from the subventri cular zone in the adult ※研究代表者と研究分担者の名前の下に一重下線を引くとよい。 （292 科研費獲得の方法とコツ第9版 ===== Page 293 ===== ＜応募者の研究遂行能力及び研究環境（つづき）＞ 基盤研究（C）（一般）6 【2 応募者の研究遂行能力及び研究環境（つづき）】 13. Sato T, Oishi K, Ida T, Kojima M. Suppressive e expression in the mouse pancreas. Endocr J. 2019 Oct 11. doi 14.Mifune H, Tajiri Y, Sakai Y, Kawahara Y, Hara K, Sato T, Nish T, Kojima M. Voluntary exercise is motivated by ghrelin, poss J Endocrinol. 2019 Oct 1. pii: JOE-19-0213.R2. グレリン受容体の結晶構造解明については、7年前から研究をスタートし、まずアンタゴニス トが結合した不活性型の構造解明に成功した。この成果に関する論文は投稿準備中であるが、す でにいくつかの学会でその内容を発表している。 •GPCRであるグレリン受容体の結晶構造解析による受容体活性化機構の解明 児島将康、2019年6月25日 第19回日本蛋白質科学会年会・第71回日本細胞生物学会大会 合同年次大会（神戸国際会議場） •グレリン研究のこれから 児島将康、2018年8月3日 第36回内分泌代謝学サマーセミナー（宮城県蔵王） また高活性型のグレリン受容体作成には、アミノ酸を変異させたグレリン受容体の活性測定な どの実験手法が必要だが、この点に関してこれまで様々な動物種においてGPCRを使ったリガン ド探索の経験を有しており、グレリン受容体の変異体作成や活性測定のメソッドをマスターして ニューロメジンU：機能未知だった神経ペプチドをオーファンGPCRのリガンドとして再発見 し、摂食抑制作用を持つことを明らかにした。 15.Kojima M, Haruno R, Nakazato M, Date Y, Murakami N, Ha Purification and identification of neuromedin U as an endoge GPR66 （FM3）. Biochem Biophys Res Commun. 2000 Sep 24;276（2）：4 CCHアミド1&2：ショウショウバエで発見したインスリン分泌促進活性を示すホルモン。 16. IdaT, Takahashi T, Tominaga H, Sato T, Sano H, Kume K, Terajima S, Nakamura Y, Mori K, Yoshida M, Kato J, Murakami N, M. Isolation of the bioactive peptides CCHamide-1 and CCHami putative role in appetite regulation as ligands for G protein （Lausanne）. 2012 Dec 31;3:177. Trissin ：ショウジョウバエから発見した機能未知の神経ペプチド。 17. IdaT, Takahashi T, Tominaga H, Sato T, Kume K, Yoshiz Murakami N, Miyazato M, Kangawa K, Kojima M. Identific peptide trissin, a ligand for an orphan G protein-coup Res Commun. 2011 Oct 14;414（1）：44-8. このように研究代表者はグレリンに関する研究を継続して行っており、不活性型のグレリン受 容体についてはすでに結晶構造解明に成功した。その研究成果を活かすことで、グレリンが結合 した活性型のグレリン受容体構造の解明も可能になると考える。 （2）研究環境 グレリンに関するこれまでの研究によって、グレリンやグレリン受容体のサンプル、グレリン 受容体の複数のアゴニストとアンタゴニストなどの実験試料は整っている。 申請者が所属する研究所は、遺伝子組み換え実験を行うP1レベルの設備が完備されている。 また生化学実験や分子生物学実験を行う基本的な実験機器等も保有している。これらは、PCR装 置、電気泳動装置、微量分光光度計、インキュベーターなどである。細胞培養の設備に関しても、 クリーンベンチやCO2インキュベーターなど、現存のもので対応できる。 以上、応募者の研究遂行能力及び研究環境によって、今回の研究計画は十分に実行可能である。 （293 ===== Page 294 ===== ＜人権の保護及び法令等の遵守への対応＞ 基盤研究（C）（一般）7 3 人権の保護及び法令等の遵守への対応（公募要領参照） 本研究を遂行するに当たって、相手方の同意・協力を必要とする研究、個人情報の取扱いの配慮を必要とする研究、生命倫 理・安全対策に対する取組を必要とする研究など指針・法令等（国際共同研究を行う国・地域の指針・法令等を含む）に基づ く手続が必要な研究が含まれている場合、講じる対策と措置を、1頁以内で記述すること。 個人情報を伴うアンケート調査・インタビュー調査・行動調査（個人履歴・映像を含む）、提供を受けた試料の使用、ヒト 遺伝子解析研究、遺伝子組換え実験、動物実験など、研究機関内外の倫理委員会等における承認手続が必要となる調査・研 究・実験などが対象となる。 該当しない場合には、その旨記述すること。 本研究計画で行う遺伝子組換えDNA 実験は久留米大学遺伝子組み換え実験安全委員会の承認 を得たものであり、大腸菌やほ乳類培養細胞や昆虫培養細胞などを扱うのに支障はない。 その他、個人情報の扱いやヒト遺伝子解析研究などには当てはまらない。 294 科研費獲得の方法とコツ 第9版 ===== Page 295 ===== ＜研究計画最終年度前年度応募を行う場合の記述事項＞ 基盤研究（C）（一般） 8 4 研究計画最終年度前年度応募を行う場合の記述事項（該当者は必ず記述すること（公募要領参照）） 本研究の研究代表者が行っている、令和7（2025）年度が最終年度に当たる継続研究課題の当初研究計画、その研究によ 得られた新たな知見等の研究成果を記述するとともに、当該研究の進展を踏まえ、本研究を前年度応募する理由（研究の展開 状況、経費の必要性等）を1頁以内で記述すること。 該当しない場合は記述欄を削除することなく、空欄のまま提出すること。 研究種目名 課題番号 研究課題名 研究期間 令和年度～ 令和7年度 初研究計画及び研究成果 前年度応募する理由 実 基 ===== Page 296 ===== 3） Web入力項目（後半）※電子申請時に入力 ＜研究経費とその必要性> 研究経費とその必要性 年度 設備備品費の明細 品名・仕様 R2 R2 R2 R2 R2 設置機関 数量単価 計 計 計 基盤研究（C）（一般） 9ー（） （金額単位：千円） 消耗品費の明細 金額 事項 生化学・分子生物 学実験用試薬 生化学・分子生物 学実験用器具 細胞培養試薬 細胞培養器具 0 計 生化学：分子生物 学実験用試薬 生化学・分子生物 学実験用発具 細胞培養試薬 細胞培養器具 0 計 生化学・分子生物 学実験用試薬 生化学・分子生物 学実験用器具 細胞培養試薬 細胞培養器具 0 金額 400 400 400 400 1600 400 400 400 400 1,600 250 250 300 300 計1,100 設備備品費、消耗品費の必要性 設備備品については現有のもの、あるいは久留米大学の学内施設のもので行う。生化学実験、分子生物学実験、培養 細胞を使った実験を行うので、消耗品を多く計上した。 （296 ※この申請書の例は、令和2年度の基盤研究（C）に採択されたものを令和7年度の様式に変更したものだが、申請書中の 暦は、一部を当時のままとしてある。 科研費獲得の方法とコツ 第9版 ===== Page 297 ===== ＜研究経費とその必要性（つづき）＞ 年度 R2 R2 R2 R3 R3 R3 R4 R4 R4 国内旅費の明細 事項 研究打ち合わせ 関連学会への出席 計 研究打ち合わせ 関連学会への出席 計 研究打ち合わせ 関連学会への出席 計 外国旅費の明細 事項 金額 50 50 100 50 50 100 50 50 100 金額 計 計 0 人件費・謝金の明細 事項 実験補助者への 謝金 金額 100 基盤研究（C）（一般） 10-（） （金額単位：千円） その他の明紙 事項 金額 計 実験補助者への 謝金 100 100通・運搬費 計 o 50 計 実験補助者への 「謝金 100 100通・運搬費 計 50 50 計 0 計 100 計 50 旅費、人件費・謝金、その他の必要性 共同研究先との打ち合わせのための旅費と、関連学会への参加のための旅費を計上した。 実験補助者への謝金を各年度10万円を計上した。 その他ではデータや試料などを共同研究先に送るために通信・運搬費を計上した。 （297 ===== Page 298 ===== ＜「研究費の応募・受入等の状況」のWeb入力イメージ） 【研究費の応募・愛入等の状況】 研究者氏名 児島 将康 （1） 応募中の研究費 役割 代表 代表 1.資金制度・研究費名（配分機関名） 2.研究期間 3.研究譟題名 4. 研究代表者氏名 1.【本応募研究課題】基盤研究（C）（一般） 2.2020年度～2022年度 3.グレリンの豚肪酸格鉄基は、なぜグレリン受容体の活 性化に必要なのか？ 4. 児島特 1.新学術領域研究（A）（公募研究）（文部科学省） 2.2020年度～2021年度 3.消化管細胞社会ダイバーシティーと1細解析の融合 による未知のペプチドホルモン探索 4. 児島康 2020年度 研究経費 （期間全体額） （千円） 2020年度 エフォート （%） 研究内容の相違点及び 他の研究費に加えて本応募研究課題に応募する理由等 （左記の研究課題を応募するに当たっての所属組織・役職） （科研費の研究代表者の場合は、研究期間全体の受入額を記入すること） 1600 30% （4,400） 3,000 総額5,000千円 本研究は消化管幹細胞に作用する未知のペプチドホルモンを探索する研究で あり、科研費の本応募研究課題とは内容が異なる。 30% （6,000） 左記の研究課題を応募するに当たっての所属組織・役職 総額6,000千円 （2）受入予定の研究費 役割 1.資金制度・研究費名（分機関名） 2.研究期間 3.研究課題名 4. 研究代表者氏名 2020年度 研究経費 （期間全体額） （千円） 2020年度 エフォート （%） 研究内容の相違点及び 他の研究費に加えて本応募研究課題に応募する理由等 （左記の研究課題を入れるに当たっての所属組織・役職】 （科研費の研究代表者の場合は、研究期間全体の受入額を記入すること） 2. 3. 年度～ 年度 % 左記の州究課題を応券するに当たっての所選組織・役職 総額 千円 年度～ 年度 % 3. 左記の研究課題を応募するに当たっての所属組織・役務 千円 （3） e-Rad外の研究費 契約の種類 1.相手機関（相手機関の国名） 2.制度名 3.研究期間 研究驟題名 予算額 エフォ ート （%） 機密 保持 契約 締結 有無 1： 相手機関の国名 通貨コード % 年度～ 年度 （4）兼菜や、外国の人材登用ブログラムへの参加、雇用契約のない名誉教授等を含む現在のすべての所属規関・役職 （兼業や、外国の人材登用プログラムへの参加、雇用契約のない名誉教授等を含む）現在のすべての所属機関・役職 相手機関の所在地 （4）、（5）その他の活動のエフォートの合計 （1）、（2）、（3）のエフォートの合計 40% 60% （298 ※現在の申請では、この項目はPDFファイルとして出力されないため、例として電子申請時の画面イメージを作った。電子申請時 の画面は4章の図4-19を参照、なお。この申請者の例は、令和2年度の基盤研究（C）に採択されたもの 変更したものだが、申請書中の年度や西暦は、一部を当時のままとしている。 科研費獲得の方法とコツ 第9版